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                                                • 產品名稱:MOBIO強力糞便DNA提取試劑盒 12830-50
                                                • 產品貨號:12830-50
                                                • 產品規格:50次
                                                • 產品品牌:mobio
                                                • 供應商:
                                                • 產品產地: 美國 產品價格:¥2516
                                                • 產品說明書:
                                                • 詳細信息:
                                                •  MOBIO強力糞便DNA提取試劑盒

                                                   

                                                  英文名

                                                  中文名

                                                  品牌

                                                  貨號

                                                  規格

                                                  價格

                                                  PowerFecal® DNA Isolation Kit

                                                  MOBIO強力糞便DNA提取試劑盒

                                                  QIAGEN-MOBIO

                                                  12830-50

                                                  50T

                                                  2516

                                                   

                                                   

                                                   

                                                   

                                                   

                                                   

                                                   

                                                  美國MOBIOPowerFecal® DNA Isolation kitHMPHuman Microbiome Project)計劃官方推薦使用試劑盒(見Manual of procedures for Human Microbime Project Core Microbiome Sampling Protocal),專門設計用于簡便快速糞便、腸內容物、生物固體樣品微生物和宿主總DNA。基于PowerSoil®DNA Isolation Kit開發,使用了無論對土壤還是糞便樣品同樣奏效的專利抑制因子去除技術(Inhibitor Removal Technology®)。IRT技術能高效去除常見于糞便樣品的多糖、亞鐵血紅素和膽汁鹽等抑制因子。30min完成250mg樣品提取,純凈的最終DNA可直接用于所有下游實驗。 

                                                      糞便或生物固體建議加樣0.25g。樣品裝入到含有石榴石研磨珠的獨立2ml Bead Beating Tube中。在研磨珠的機械碰撞和化學試劑對細胞膜的裂解作用促使下宿主、微生物細胞裂解,高效的提取效果足以應付最難搞的微生物類型。專利的抑制因子去除技術(Inhibitor Removal Technology®)接著去掉糞便樣品中常見的PCR抑制物。總基因組DNA吸附到硅膠濾膜上。經過沖洗和洗脫,純凈的最終DNA可直接用于PCRqPCR、第二代測序等進一步應用。
                                                      1、采樣

                                                      對于嚙齒動物,最簡單直接的辦法是收集糞粒。動物關在籠子里,帶上無菌手套撿拾籠舍底面的糞粒,放入到BD Falcon Eppendorf Tube管這樣的無菌裝置中即可。

                                                      收集人的糞便樣品或許有點臟。所以許多實驗室提供一種桶狀的裝置,可放置在座廁下收集樣品。也可以用報紙接著樣品,以吸收更多水分。關鍵是要提供適當指導,避免樣品受到廁紙或廁所壁的污染。指導也應該包括建議先排尿,避免尿液污染糞便樣品。

                                                      若要收集肛周棉拭子,確認使用的是滅菌棉拭子,采樣風干一個小時后放到帶帽的無菌運輸容器,避免微生物冷凍保存前降解。

                                                      2、樣品運輸與保存

                                                      樣品收集后在DNA提取前可一直放在同一個容器里運輸和保存。或者分裝后放入到特殊滅菌收集容器中。

                                                      若樣品是在家里自行收集的,應把樣品容器放入到家庭冰箱中。快遞到實驗室時用冰袋保溫。實驗室中收集的樣品可馬上冷凍保存。HMP項目,要求樣品在特定的收集容器中-80冷凍保存,24-48h內提取DNA。也有專家觀察到冷凍保存長達一年的樣品的微生物多樣性與現場馬上提取的區別不大。 做微生物多樣性,我們的專家一致認為,用QiagenRNALater這類的保護液會影響下游DNA提取,請避免使用。有專家觀察到使用RNALater的糞便樣品容易分層,DNA回收率下降。(糞便樣品運輸包裝.PDF)

                                                      重復樣品分析可以減少處理過程、稱重等環節帶來的誤差。但是在嚴格遵循最佳實驗室規范、質量管理系統進行的微生物分析質量控制和質量保證程序下,無需重復樣品。PhloChip分析也內建了質量控制程序保證分析結果。

                                                      3、分開處理健康與患病個體糞便

                                                      按照BSL-2規定條件分別處理健康與患病個體,包括戴好面具、手套及穿著實驗室工作服,避免潛在病原感染。

                                                      便秘個體糞便在后續DNA提取中需要適當延長珠磨研磨時間,稀糞需要離心去除多余液體。

                                                      4DNA提取

                                                      現有很多種方案從糞便樣品中提取微生物DNA,而我們所有的專家都推薦使用珠磨研磨法和MOBIOPowerSoil® DNA Isolation Kit。非珠磨研磨法無法回收格蘭性陽性菌DNA。使用MOBIOPowerSoil® Isolation Kit,最終洗脫DNA濃縮了為微生物DNAPCR敏感度更高。人或動物的真核細胞在加熱和珠磨研磨的環境下比微生物細胞更快裂解,DNA釋放游離在上清液中。游離的DNA在長時間的機械作用力下斷成小片段,綁定吸附步驟被沖洗掉。微生物DNA保存大分子片段狀態留在硅膠離心柱上。

                                                      我們的專家們觀察到PowerSoil® Kit這類采用珠磨研磨技術的試劑盒提取0.1g糞便樣品約可獲得100μl 2-20ng/μl 的總基因組DNA。人糞便或者腸內容物建議加樣0.1-0.25g。較為干燥的老鼠糞便,建議減少加樣量到0.1g。推薦使用試劑盒自帶的研磨珠,沒必要另外購買玻璃或者二氧化硅研磨珠。

                                                  有專家觀察到人糞便DNA中約有2%的人類DNA。相反,其它類型的樣品如陰道棉拭子提取的DNA最多可含80%人類DNA

                                                      5、去除PCR抑制因子

                                                      糞便與土樣一樣帶有大量PCR抑制因子。抑制因子的種類因飲食結構而異。抑制因子會吸附到離心柱硅膠濾膜上,伴隨DNA一并被洗脫下來。這類樣品的總DNA常呈黃至棕色,分光光度法讀數偏低。因此,我們推薦使用MOBIO含有抑制因子去除技術?IRT)的PowerSoil® DNA Isolation Kit,在綁定樣品到離心柱前,去除裂解物中腐植酸、多酚、多糖、亞鐵血紅素和染料等雜質,可獲得高純度的DNA,擴增后得到更準確的微生物群落結構信息。

                                                   

                                                   

                                                   

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